本發(fā)明涉及，具體是基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、宮頸癌是全球女性癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，其早期診斷對提高治愈率至關(guān)重要；目前臨床常用的篩查手段主要依賴hpv?dna檢測和宮頸細胞學(xué)檢查(如tct)，輔以p16蛋白免疫組化等輔助診斷技術(shù)。然而，現(xiàn)有技術(shù)存在以下關(guān)鍵缺陷：
2、一、現(xiàn)有技術(shù)依賴單一生物標(biāo)志物檢測，存在顯著局限性：
3、hpv檢測雖靈敏度高，但特異性不足，導(dǎo)致健康人群過度轉(zhuǎn)診；
4、p16免疫組化對低級別病變的判讀主觀性強且陽性率低，易出現(xiàn)“局灶陽性”爭議，漏檢風(fēng)險突出；
5、僅關(guān)注靜態(tài)表達量，忽視基因功能活性(如dna復(fù)制異常)及空間分布特征(如核內(nèi)聚集模式)，無法捕捉早期癌變的分子動態(tài)；
6、二、現(xiàn)有診斷標(biāo)準(zhǔn)依賴固定閾值，導(dǎo)致以下問題：
7、宮頸脫落細胞中混雜大量非目標(biāo)細胞(如炎癥、化生細胞)，稀釋檢測信號，假陰性率升高；
8、放療后患者因dna損傷反應(yīng)易引發(fā)標(biāo)志物誤判，假陽性風(fēng)險突出；
9、對不典型病變(如asc-us/lsil)缺乏多指標(biāo)聯(lián)合分析模型，依賴重復(fù)活檢或隨訪，效率低下。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的在于提供基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法及其應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
3、基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法，包括：
4、s1、獲取待檢測樣本中的細胞或組織樣本并進行預(yù)處理；
5、s2、測量所述樣本中g(shù)ins1基因的表達量；
6、s3、將所測得的gins1表達量與已知的宮頸癌樣本表達量進行比較；
7、s4、根據(jù)比較結(jié)果，判斷待檢測樣本是否為宮頸癌。
8、作為本發(fā)明再進一步的方案：所述s1中樣本為宮頸脫落細胞、宮頸活檢組織、宮頸液基細胞學(xué)檢測殘留樣本或血液中的循環(huán)腫瘤細胞；
9、所述s1中的預(yù)處理方法為：
10、對液基細胞學(xué)殘留樣本進行蛋白酶k裂解處理；
11、采用核酸-蛋白共提取試劑盒同步獲得dna和蛋白組分；
12、采用表面修飾cd49f/itga6抗體的微流控芯片從宮頸脫落細胞中分選基底上皮細胞群，去除炎癥細胞干擾。
13、作為本發(fā)明再進一步的方案：所述s2中g(shù)ins1基因表達量檢測方法為定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、數(shù)字pcr、免疫組化染色強度分析、質(zhì)譜蛋白定量技術(shù)或高通量測序中的至少一種。
14、作為本發(fā)明再進一步的方案：所述s3中設(shè)定gins1表達量閾值為健康人群樣本平均值的1.8-2.5倍，高于閾值則判定為宮頸癌陽性。
15、作為本發(fā)明再進一步的方案：所述s4中樣本結(jié)合至少兩種其他宮頸癌標(biāo)志物表達量進行聯(lián)合診斷，所述其他標(biāo)志物選自hpv?e6/e7?mrna、p16蛋白、端粒酶活性、cyclin?d1蛋白、p53基因突變、ki-67、survivin或hpv?dna載量。
16、本發(fā)明還公開了一種用于宮頸癌鑒別診斷的試劑盒，包括：
17、gins1特異性抗體、抗體反應(yīng)檢測試劑、gins1表達量標(biāo)準(zhǔn)品比色卡及操作說明書
18、作為本發(fā)明再進一步的方案：所述gins1特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；所述抗體反應(yīng)檢測試劑包含酶標(biāo)二抗、顯色底物和反應(yīng)終止液，所述抗體反應(yīng)檢測試劑適用于免疫組化或elisa檢測。
19、作為本發(fā)明再進一步的方案：還包括陽性對照樣本，所述陽性對照為經(jīng)病理確診的宮頸癌組織切片或?qū)m頸癌細胞裂解液。
20、作為本發(fā)明再進一步的方案：所述試劑盒為膠體金免疫層析試紙條形式，包含gins1單克隆抗體標(biāo)記的檢測線和質(zhì)控線。
21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
22、1、相較于傳統(tǒng)依賴單一生物標(biāo)志物(如hpv?dna或p16蛋白定性檢測)的方法，本發(fā)明通過整合gins1基因的表達水平、功能活性及空間分布特征，構(gòu)建多模態(tài)檢測體系，這種多維度的分析不僅能夠有效區(qū)分宮頸癌與良性病變(如炎癥或化生)，還可識別早期癌變中少量異常細胞的分子特征，顯著降低因樣本異質(zhì)性導(dǎo)致的假陰性或假陽性風(fēng)險，解決了現(xiàn)有技術(shù)中因單指標(biāo)局限性造成的誤診問題。
23、2、針對傳統(tǒng)固定閾值法在放療后患者、慢性宮頸炎等復(fù)雜病例中易失效的缺陷，本發(fā)明創(chuàng)新引入dna損傷響應(yīng)動態(tài)校正機制，通過實時評估樣本中dna損傷程度自動調(diào)整gins1判定閾值，使診斷標(biāo)準(zhǔn)具備環(huán)境適應(yīng)性；同時，聯(lián)合hpv?e6/e7?mrna、p16蛋白等多標(biāo)志物的加權(quán)決策模型，可對臨界值病例進行精準(zhǔn)分層，有效解決了現(xiàn)有技術(shù)對不典型病變(如asc-us/lsil)診斷模糊的難題，為臨床提供更明確的診療依據(jù)。
1.基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法，其特征在于，所述s1中樣本為宮頸脫落細胞、宮頸活檢組織、宮頸液基細胞學(xué)檢測殘留樣本或血液中的循環(huán)腫瘤細胞；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法，其特征在于，所述s2中g(shù)ins1基因表達量檢測方法為定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、數(shù)字pcr、免疫組化染色強度分析、質(zhì)譜蛋白定量技術(shù)或高通量測序中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法，其特征在于，所述s3中設(shè)定gins1表達量閾值為健康人群樣本平均值的1.8-2.5倍，高于閾值則判定為宮頸癌陽性。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gins1表達量的宮頸癌鑒別診斷方法，其特征在于，所述s4中樣本結(jié)合至少兩種其他宮頸癌標(biāo)志物表達量進行聯(lián)合診斷，所述其他標(biāo)志物選自hpve6/e7?mrna、p16蛋白、端粒酶活性、cyclin?d1蛋白、p53基因突變、ki-67、survivin或hpvdna載量。
6.一種用于宮頸癌鑒別診斷的試劑盒，其特征在于，包括：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于宮頸癌鑒別診斷的試劑盒，其特征在于，所述gins1特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；所述抗體反應(yīng)檢測試劑包含酶標(biāo)二抗、顯色底物和反應(yīng)終止液，所述抗體反應(yīng)檢測試劑適用于免疫組化或elisa檢測。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于宮頸癌鑒別診斷的試劑盒，其特征在于，還包括陽性對照樣本，所述陽性對照為經(jīng)病理確診的宮頸癌組織切片或?qū)m頸癌細胞裂解液。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于宮頸癌鑒別診斷的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為膠體金免疫層析試紙條形式，包含gins1單克隆抗體標(biāo)記的檢測線和質(zhì)控線。