本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)或生物制藥，尤其涉及一種抗降鈣素原納米抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、降鈣素原(procalcitonin，pct)是一種由甲狀腺c細(xì)胞產(chǎn)生的激素前體，正常情況下在健康人體內(nèi)的濃度很低。病毒感染和非特異性炎癥不會導(dǎo)致降鈣素原水平升高,但細(xì)菌感染、嚴(yán)重休克和多器官功能衰竭綜合征等都可導(dǎo)致降鈣素原水平顯著升高,且升高幅度與病情嚴(yán)重程度和患者預(yù)后密切相關(guān)，降鈣素原檢測在感染性疾病的鑒別診斷、危重患者監(jiān)測及其治療效果評估、預(yù)后判斷和用藥指導(dǎo)等方面具有很高的臨床應(yīng)用價值。pct已經(jīng)成為一項重要的生物標(biāo)志物，用于診斷和監(jiān)測感染性疾病、炎癥狀態(tài)以及全身炎癥反應(yīng)綜合征等情況。

2、納米抗體是駝重鏈抗體可變區(qū)(vhh)的結(jié)構(gòu)，單獨(dú)的vhh具有與抗原結(jié)合的活性，納米抗體由于其特殊的結(jié)構(gòu)特征，與傳統(tǒng)單克隆抗體比較，納米抗體具有可溶性高、不易聚集、耐高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等優(yōu)勢，納米抗體較小的體積，具有更強(qiáng)的組織穿透能力，同時納米抗體易在細(xì)菌、酵母、真菌等微生物系統(tǒng)中進(jìn)行體外原核/真核細(xì)胞的表達(dá)擴(kuò)增，從而能夠以較低的成本進(jìn)行大量生產(chǎn)；在分子診斷、藥物遞送、腫瘤免疫治療等生物醫(yī)學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)中有廣泛的應(yīng)用。

3、截至目前，尚未有針對pct靶點的納米抗體公開。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種具有較好結(jié)合活性，較好的診斷靈敏度，并且生產(chǎn)簡便的抗pct納米抗體。基于目前對于診斷靈敏度和精度的需求，開發(fā)了特異性靶向pct的納米抗體，在檢測領(lǐng)域具較高的應(yīng)用潛力。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明第一方面提供一種抗pct納米抗體，所述納米抗體中的vhh鏈的互補(bǔ)決定區(qū)cdr區(qū)如下所示：

2、(1)seq?id?no:5所示的cdr1、seq?id?no:6所示的cdr2、和seq?id?no:7所示的cdr3；或者

3、(2)seq?id?no:12所示的cdr1、seq?id?no:13所示的cdr2、和seq?id?no:14所示的cdr3。

4、在一個優(yōu)選的實施例中，所述的抗pct納米抗體，所述的cdr1、cdr2和cdr3由vhh鏈的框架區(qū)fr1、fr2、和fr3所隔開。

5、在一個優(yōu)選的實施例中，所述的抗pct納米抗體的vhh鏈還包括框架區(qū)fr，所述的框架區(qū)fr如下所示：

6、(1)seq?id?no:2所示的fr1、seq?id?no:3所示的fr2、和seq?id?no:4所示的fr3；或者

7、(2)seq?id?no:9所示的fr1、seq?id?no:10所示的fr2、和seq?id?no:11所示的fr3。

8、在一個優(yōu)選的實施例中，所述的抗pct納米抗體的vhh鏈的氨基酸序列選自下組：seq?id?no:1、seq?id?no:8、或其組合。

9、本發(fā)明第二方面提供一種抗pct抗體，所述pct抗體是針對pct表位的抗體，并且具有第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體。

10、本發(fā)明第三方面提供一種抗pct抗體，所述抗體包括一個或多個如第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體。

11、在一個優(yōu)選實施例中，本發(fā)明第三方面的所述pct抗體包括單體、二價抗體、和/或多價抗體。

12、本發(fā)明第四方面提供一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼選自下組的蛋白質(zhì)：本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體。

13、本發(fā)明第五方面提供一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體含有本發(fā)明第四方面提供的多核苷酸。

14、本發(fā)明第六方面提供一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞含有本發(fā)明第五方面提供的所述的表達(dá)載體，或其基因組中整合有本發(fā)明第四方面提供的一種多核苷酸。

15、本發(fā)明第七方面提供一種產(chǎn)生抗pct納米抗體的方法，所述方法包括如下步驟：

16、(a)在適合產(chǎn)生納米抗體的條件下，培養(yǎng)本發(fā)明第六方面提供的宿主細(xì)胞，從而獲得含所述抗pct納米抗體的培養(yǎng)物；

17、(b)從所述培養(yǎng)物中分離或回收所述的抗pct納米抗體；以及

18、(c)任選地，純化和/或修飾得步驟(b)中獲得的抗pct納米抗體。

19、本發(fā)明第七方面提供一種免疫偶聯(lián)物，該免疫偶聯(lián)物含有：

20、(a)本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體；

21、(b)選自下組的偶聯(lián)部分：可檢測標(biāo)記物、藥物、毒素、細(xì)胞因子、放射性核素、酶、金納米顆粒/納米棒、納米磁粒、病毒外殼蛋白或vlp、或其組合。

22、本發(fā)明第八方面提供一種多特異性抗體，所述的多特異性抗體包含：本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體。

23、本發(fā)明第九方面提供一種重組蛋白，所述的重組蛋白具有：

24、(i)本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體；以及

25、(ii)任選的協(xié)助表達(dá)和/或純化的標(biāo)簽序列。

26、本發(fā)明第十方面提供一種藥物組合物，所述藥物組合物含有：

27、(i)本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體；以及

28、(ii)藥學(xué)上可接受的載體。

29、本發(fā)明第十一方面提供本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體、本發(fā)明第七方面提供的免疫偶聯(lián)物、本發(fā)明第八方面提供的多特異性抗體、本發(fā)明第九方面提供的重組蛋白或本發(fā)明第十方面提供的藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療與pct相關(guān)的疾病的藥物方面的用途。

30、本發(fā)明第十二個方面提供本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體、本發(fā)明第七方面提供的免疫偶聯(lián)物、本發(fā)明第八方面提供的多特異性抗體、本發(fā)明第九方面提供的重組蛋白或本發(fā)明第十方面提供的藥物組合物在制備檢測pct的試劑、檢測板或試劑盒方面的用途。

31、本發(fā)明第十一方面提供一種檢測樣品中pct蛋白的方法，所述方法為非診斷目的，所述方法包括步驟：

32、(1)將樣品與本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體、本發(fā)明第七方面提供的免疫偶聯(lián)物、本發(fā)明第八方面提供的多特異性抗體、本發(fā)明第九方面提供的重組蛋白；

33、(2)檢測是否形成抗原-抗體復(fù)合物，其中形成復(fù)合物就表示樣品中存在pct蛋白。

34、本發(fā)明第十二個方面提供一種pct蛋白檢測試劑，所述的檢測試劑包含：

35、(i)本發(fā)明第一方面各個優(yōu)選實施例中記載的抗pct納米抗體、本發(fā)明第三、四方面記載的所述的抗pct抗體、本發(fā)明第七方面提供的免疫偶聯(lián)物、本發(fā)明第八方面提供的多特異性抗體、本發(fā)明第九方面提供的重組蛋白；以及

36、(ii)檢測學(xué)上可接受的載體。

37、本發(fā)明第十三個方面提供一種檢測pct蛋白的試劑盒，所述試劑盒含有本發(fā)明第七方面提供的免疫偶聯(lián)物或本發(fā)明第十二個方面提供的檢測試劑，以及說明書。

38、本發(fā)明第十四個方面提供一種免疫偶聯(lián)物在制備體內(nèi)檢測pct蛋白的造影劑方面的用途，所述免疫偶聯(lián)物為第七方面提供的免疫偶聯(lián)物。

39、本發(fā)明提供的抗體或其抗原結(jié)合片段具有以下的一種或多種優(yōu)勢：

40、1、本技術(shù)首次提供一種抗pct納米抗體,該的納米抗體能與pct抗原特異性結(jié)合，具有較強(qiáng)的親和力。

41、2、采用本發(fā)明表2展示的檢測納米抗體和包被納米抗體的組合，可以有效的檢測pct免疫原，具有較高檢測靈敏度，顯著高于商品化的抗pct抗體的檢測效果。