本發(fā)明屬于中藥檢測(cè)，具體涉及一種百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、百蕊草為檀香科植物百蕊草thesium.chinense?turcz.的干燥全草，具有清熱解毒，消腫功效；具有抗病毒、抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳等作用；可用于感冒發(fā)熱，扁桃體炎，咽喉炎，支氣管炎，肺炎，肺膿瘍，乳腺炎，癤腫。百蕊草含有黃酮、有機(jī)酸、生物堿、甾醇、酚類等，主要成分為黃酮類，包括百蕊草素i～iv、紫云英苷、山奈酚、槲皮素、蘆丁等。目前僅有部分地方標(biāo)準(zhǔn)對(duì)百蕊草中含量成分進(jìn)行單一控制，現(xiàn)行版各法定標(biāo)準(zhǔn)收載的百蕊草藥材及飲片均無(wú)特征圖譜項(xiàng)內(nèi)容?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中公開了部分對(duì)百蕊草特征圖譜的研究，但其獲得的特征圖譜中存在特征峰個(gè)數(shù)較少，個(gè)別峰響應(yīng)值較低，且分離度難達(dá)標(biāo)、重現(xiàn)較為困難的缺陷；且部分方法中特征峰數(shù)目較少，s峰與其他峰相距較遠(yuǎn)，出峰不集中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、因此，本發(fā)明的目的在于提供一種百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法，該方法根據(jù)百蕊草水提物及其制劑的特點(diǎn)，建立了該品種的特征圖譜，特征峰個(gè)數(shù)多且分離度高，共10個(gè)共有特征峰指認(rèn)其中7個(gè)，特征峰保留時(shí)間分布均勻，特征性明顯，重復(fù)性良好，可對(duì)百蕊草水提物及其制劑進(jìn)行全面質(zhì)量控制。

2、為此，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供一種百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：(1)供試品溶液的制備；(2)取供試品溶液采用高效液相色譜法檢測(cè)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相包括含磷酸的水溶液和甲醇，梯度洗脫程序包括：0→10min→18～20min→25～30min→32～35min，流動(dòng)相中甲醇的體積百分?jǐn)?shù)為：2％→5％→40％～42％→46％～48％→55％，檢測(cè)波長(zhǎng)為240～320nm。

4、可選的，步驟(2)還滿足如下1)～4)中的至少一項(xiàng)：

5、1)在檢測(cè)的前18min，檢測(cè)波長(zhǎng)為240～254nm，18min后為300～320nm；

6、2)流速為0.6～0.8ml/min，柱溫為20～30℃；可選的，流速為0.7ml/min，柱溫為25℃；

7、3)檢測(cè)過(guò)程中采用規(guī)格4.6mm×150mm，2.7μm的色譜柱；

8、4)進(jìn)樣體積為5～10μl；可選的，為10μl；

9、5)所述含磷酸的水溶液中磷酸的體積百分?jǐn)?shù)為0.08％～0.12％；可選的，為0.1％。

10、可選的，梯度洗脫程序包括：0→10min→19min→28min→32min→35min，流動(dòng)相中甲醇的體積百分?jǐn)?shù)為：2％→5％→40％→47％→55％→55％。

11、可選的，所述步驟(1)中包括，稱取百蕊草供試品，加溶劑提取，得到提取液，固液分離，取液體，即為供試品溶液。

12、可選的，所述步驟(1)還滿足如下a～f中的任意一項(xiàng)或者多項(xiàng)：

13、a、當(dāng)百蕊草供試品為百蕊草制劑時(shí)，百蕊草供試品與溶劑的質(zhì)量體積比為0.1～0.5g：20ml；可選的，百蕊草供試品與溶劑的質(zhì)量體積比為0.2g：20ml；

14、b、當(dāng)百蕊草供試品為百蕊草藥材或百蕊草飲片時(shí)，在加溶劑提取前還包括將百蕊草供試品進(jìn)行水提取的步驟；可選的，所述水提取包括向百蕊草供試品中以質(zhì)量體積比0.5～1.2g：50ml加入水，稱定重量，回流30～60min，取出，過(guò)濾，蒸干，得到殘?jiān)缓笫褂盟鰵堅(jiān)M(jìn)行加溶劑提取的步驟，百蕊草供試品與溶劑的質(zhì)量體積比為0.5～1.2g：20ml；可選的，百蕊草供試品與溶劑的質(zhì)量體積比為0.8g：20ml；

15、c、提取方式包括超聲提取或回流提??；可選的，所述超聲提取的功率為400～600w，頻率為30～50khz；

16、d、提取時(shí)間為30～60min；可選的，所述提取時(shí)間為30min；

17、e、所述固液分離選自離心或者過(guò)濾；

18、f、溶劑選自甲醇、水中的一種或者多種；可選的，為體積百分?jǐn)?shù)10％～50％甲醇的水溶液或水。

19、可選的，所述的構(gòu)建方法還包括采用百蕊草素i、腺苷、尿苷、鳥苷、5-o-阿魏?？鼘幩帷?-o-阿魏?？鼘幩?、6”-丙二酰百蕊草素i中的至少一種加溶劑制備對(duì)照品溶液的步驟，以及按照上述構(gòu)建方法中的高效液相色譜法檢測(cè)對(duì)照品溶液得到對(duì)照品圖譜的步驟；和/或，采用百蕊草對(duì)照藥材為參照物按照上述構(gòu)建方法中的步驟(1)制備對(duì)照品參照物溶液，按照上述構(gòu)建方法中的高效液相色譜法檢測(cè)對(duì)照品參照物溶液得到對(duì)照品參照物圖譜的步驟。

20、可選的，每1ml對(duì)照品溶液中含對(duì)照品5～100μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含百蕊草素i90～100μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含腺苷5～15μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含尿苷5～15μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含鳥苷5～15μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含5-o-阿魏?？鼘幩?0～30μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含4-o-阿魏?？鼘幩?0～30μg；可選的，1ml對(duì)照品溶液中含6”-丙二酰百蕊草素i?20～30μg。

21、可選的，對(duì)照品溶液制備中所采用的溶劑為甲醇。

22、可選的，所述百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜滿足如下(1)～(2)的至少一項(xiàng)：

23、(1)具有10個(gè)共有特征峰，峰2為尿苷，峰3為腺苷，峰4為鳥苷，峰7為5-o-阿魏酰奎寧酸，峰8為4-o-阿魏?？鼘幩?，峰9為百蕊草素i，峰10為6”-丙二酰百蕊草素i；

24、(2)具有10個(gè)共有特征峰，峰3與腺苷對(duì)照品參照物峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，與腺苷對(duì)照品參照峰相對(duì)應(yīng)的峰為s1峰，峰9與百蕊草素i對(duì)照品參照物峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，與百蕊草素i對(duì)照品參照峰相對(duì)應(yīng)的峰為s2峰，峰1、峰2、峰4與s1峰的相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±10％的范圍內(nèi)，峰5～峰8、峰10與s2峰的相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±10％的范圍內(nèi)；規(guī)定值為：0.44(峰1)、0.84(峰2)、1.41(峰4)、0.62(峰5)、0.75(峰6)、0.77(峰7)、0.85(峰8)、1.08(峰10)。

25、本發(fā)明提供如上述百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法在百蕊草藥物制劑的質(zhì)量檢測(cè)中的應(yīng)用。

26、本發(fā)明還提供一種百蕊草水提物及其制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括將待測(cè)百蕊草產(chǎn)品的特征圖譜與百蕊草水提物及其制劑的對(duì)照特征圖譜進(jìn)行比較的步驟；所述待測(cè)百蕊草產(chǎn)品的特征圖譜為使用待測(cè)百蕊草產(chǎn)品按照上述構(gòu)建方法構(gòu)建得到，所述百蕊草水提物及其制劑對(duì)照特征圖譜選自如下(1)～(3)中任意一項(xiàng)：

27、(1)具有10個(gè)共有特征峰，峰3與腺苷對(duì)照品參照物峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，與腺苷對(duì)照品參照峰相對(duì)應(yīng)的峰為s1峰，峰9與百蕊草素i對(duì)照品參照物峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，與百蕊草素i對(duì)照品參照峰相對(duì)應(yīng)的峰為s2峰，峰1、峰2、峰4與s1峰的相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±10％的范圍內(nèi)，峰5～峰8、峰10與s2峰的相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±10％的范圍內(nèi)；規(guī)定值為：0.44(峰1)、0.84(峰2)、1.41(峰4)、0.62(峰5)、0.75(峰6)、0.77(峰7)、0.85(峰8)、1.08(峰10)；

28、(2)使用單批次或者多批次百蕊草水提物和/或其制劑按照上述構(gòu)建方法得到的百蕊草水提物和/或其制劑的特征圖譜；

29、(3)使用多批次百蕊草水提物和/或其制劑按照上述構(gòu)建方法得到的特征圖譜通過(guò)平均值或者中位數(shù)法制成對(duì)照特征圖譜。

30、本發(fā)明技術(shù)方案，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

31、1.本發(fā)明提供的百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相包括含磷酸的水溶液和甲醇，通過(guò)特定的梯度洗脫程序及特定檢測(cè)波長(zhǎng)，得到10個(gè)共有特征峰，特征峰數(shù)量較多，其中實(shí)現(xiàn)了包括腺苷峰、百蕊草素ⅰ峰在內(nèi)的共有特征峰的分離，且洗脫程序快速、簡(jiǎn)單，得到的特征圖譜結(jié)果清晰、基線平穩(wěn)，特征峰峰形好、分離度高、響應(yīng)適中，峰1、峰2、峰4與s1峰，峰5～峰8、峰10與s2峰的距離較近，出峰分布均勻，能夠全面反映百蕊草水提物及其制劑內(nèi)在質(zhì)量和用藥安全，更為全面、客觀、快速地為百蕊草水提物及其制劑的質(zhì)量檢測(cè)和控制提供依據(jù)。還可以準(zhǔn)確定位尿苷、鳥苷、5-o-阿魏酰奎寧酸、4-o-阿魏?？鼘幩?、6”-丙二酰百蕊草素i的峰位置，充分的反映百蕊草水提物及其制劑的整體性和特征性。

32、2.本發(fā)明提供的百蕊草水提物及其制劑的特征圖譜的構(gòu)建方法，根據(jù)百蕊草化學(xué)成分、藥理藥效作用、水煎提取工藝等藥材自身特點(diǎn)，選擇與藥味功效相關(guān)的黃酮類、核苷類等水溶性成分作為研究主要成分，通過(guò)優(yōu)化色譜條件、檢測(cè)波長(zhǎng)、提取溶劑、提取方式、提取溶劑用量等提取條件進(jìn)行考察，確定了最佳提取工藝和色譜條件，使得峰響應(yīng)更高，分離效果更好，能夠更加全面的對(duì)百蕊草水提物及其制劑進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。且本方法的供試品處理制作簡(jiǎn)便，色譜條件容易實(shí)現(xiàn)，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、方法重現(xiàn)性較好。

33、3.本發(fā)明所述的百蕊草水提物及其制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，通過(guò)待測(cè)百蕊草水提物及其制劑產(chǎn)品的特征圖譜與百蕊草水提物及其制劑的對(duì)照特征圖譜進(jìn)行比較，可以全面、清楚、有效對(duì)百蕊草水提物及其制劑進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。